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SDAUWY新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
分子新手，PCR產(chǎn)物回收濃度太低，請(qǐng)教各位蟲(chóng)友！ 已有6人參與
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| 本人剛開(kāi)始接觸分子方面的試驗(yàn)，準(zhǔn)備做RNA干擾，目前正用帶T7的引物跑PCR，產(chǎn)物帶挺亮，然后用天根的試劑盒切膠回收的濃度太低，一般都在30ng/μl左右。我后續(xù)要用這個(gè)回收產(chǎn)物做模板走promega T7BiboMAX Express RNAi System 這個(gè)試劑盒的程序，要求模板量在1 μg，但我的回收產(chǎn)物遠(yuǎn)不夠這個(gè)量，請(qǐng)教各位蟲(chóng)友怎么提高回收產(chǎn)物的量，或者有做過(guò)這個(gè)的我想請(qǐng)教下整個(gè)過(guò)程，非常感謝！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
SDAUWY(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-06-19 20:41:31
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
SDAUWY(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-06-19 20:41:31
擴(kuò)PCR多擴(kuò)幾管，電泳鑒定的時(shí)候，跟MARKER比對(duì)一下，粗略算下濃度�；厥盏臅r(shí)候，就按正常的步驟回收，但是最后加水溶解的時(shí)候，一定記得水滴在回收柱子的膜上面，一般20ul夠了。比如你擴(kuò)了3份，第一個(gè)柱子用20ul溶解后，這20ul再加到第二份的柱子膜上面，再溶一次，然后再溶第三個(gè)柱子，濃度會(huì)提的很高，灰常亮 切記水一定要滴到膜上面，否則回收產(chǎn)物溶不下來(lái)。 |
6樓2015-06-19 11:03:54
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2樓2015-06-18 10:36:19
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3樓2015-06-18 11:03:24
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4樓2015-06-18 15:54:09
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