當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖

SDAUWY

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 141
帖子: 3
在線: 3.2小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2124788
注冊(cè): 2012-11-13
性別: GG
專業(yè): 昆蟲(chóng)學(xué)

[求助] 分子新手，PCR產(chǎn)物回收濃度太低，請(qǐng)教各位蟲(chóng)友！已有6人參與

本人剛開(kāi)始接觸分子方面的試驗(yàn)，準(zhǔn)備做RNA干擾，目前正用帶T7的引物跑PCR，產(chǎn)物帶挺亮，然后用天根的試劑盒切膠回收的濃度太低，一般都在30ng/μl左右。我后續(xù)要用這個(gè)回收產(chǎn)物做模板走promega T7BiboMAX Express RNAi System 這個(gè)試劑盒的程序，要求模板量在1 μg，但我的回收產(chǎn)物遠(yuǎn)不夠這個(gè)量，請(qǐng)教各位蟲(chóng)友怎么提高回收產(chǎn)物的量，或者有做過(guò)這個(gè)的我想請(qǐng)教下整個(gè)過(guò)程，非常感謝！

回復(fù)此樓

» 收錄本帖的淘帖專輯推薦

分子生物知識(shí)

蛋白表達(dá)純化鑒定精華

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有150人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

急��！請(qǐng)做過(guò)體內(nèi)藥物分析的蟲(chóng)友進(jìn)來(lái)看看�。。� 已經(jīng)有10人回復(fù)
各位蟲(chóng)友能幫忙分析下我提取的果實(shí)RNA問(wèn)題可能出在哪嗎？已經(jīng)有30人回復(fù)
各位蟲(chóng)友們，小弟想問(wèn)一下我這個(gè)核磁氫譜咋回事，不太會(huì)分析已經(jīng)有5人回復(fù)
消除催化零回復(fù)，感謝蟲(chóng)友來(lái)交流(十二）已經(jīng)有19人回復(fù)
想與各位蟲(chóng)友交流一下job's plot的相關(guān)問(wèn)題已經(jīng)有13人回復(fù)
提取的土壤中的DNA濃度低，純度也很低怎么改善一下？已經(jīng)有11人回復(fù)
做普通的實(shí)時(shí)定量PCR需要那些試劑？跪求懂行的蟲(chóng)友指教已經(jīng)有3人回復(fù)
求助：pcr 10微升體系跑出條帶很亮，50微升體系跑不出東西已經(jīng)有4人回復(fù)
PCR結(jié)果不好，膠回收后濃度很低已經(jīng)有10人回復(fù)
DNA濃度太低怎么辦已經(jīng)有6人回復(fù)
各位蟲(chóng)友，我想問(wèn)下:分子軌道理論包括:簡(jiǎn)單分子軌道理論（定域分子軌道理論）和離域已經(jīng)有4人回復(fù)
請(qǐng)高手幫忙分析一下這個(gè)PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖已經(jīng)有5人回復(fù)
載體雙酶切后，膠回收的效率極低，膠回收試劑盒正常，雙酶切后的電泳圖也正常，已經(jīng)有13人回復(fù)
關(guān)于PCR引物中加入酶切位點(diǎn)的設(shè)計(jì)方法和酶切問(wèn)題！新手，求幫忙��！已經(jīng)有4人回復(fù)
PCR產(chǎn)物雙酶切遇到問(wèn)題，求救�。�！已經(jīng)有7人回復(fù)
如何濃縮PCR產(chǎn)物？已經(jīng)有7人回復(fù)
各種綜合問(wèn)題：酶切膠回收質(zhì)粒濃縮測(cè)濃度已經(jīng)有7人回復(fù)
pcr產(chǎn)物膠回收濃度低，能不能和T載體連接已經(jīng)有16人回復(fù)
rt-pcr電泳圖，求好心蟲(chóng)友幫助分析一下，跪謝。。。已經(jīng)有14人回復(fù)
PCR產(chǎn)物再進(jìn)行PCR 已經(jīng)有19人回復(fù)
新提的質(zhì)粒DNA，關(guān)于濃度和純度蟲(chóng)友們發(fā)表一些看法吧已經(jīng)有32人回復(fù)
PCR產(chǎn)物回收之后跑膠濃度過(guò)低已經(jīng)有17人回復(fù)
天根公司的Long Taq DNA Polymerase的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物是平末端還是帶A尾巴？已經(jīng)有8人回復(fù)
【求助/交流】連接產(chǎn)物電泳已經(jīng)有17人回復(fù)
【求助/交流】（5.20更新）PCR產(chǎn)物電泳沒(méi)有條帶，why? 已經(jīng)有20人回復(fù)

1樓 2015-06-17 22:30:30

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

saiman131415

銅蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 137.8
散金: 50
紅花: 1
帖子: 51
在線: 167.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1383350
注冊(cè): 2011-08-29
性別: GG
專業(yè): 病毒學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
SDAUWY(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-06-19 20:41:39

試劑盒回收一般是不會(huì)出問(wèn)題的，你的PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度要么短了，要么長(zhǎng)了，膠水浴溶解后加1倍預(yù)冷異丙醇和5ul 3M 醋酸鈉，冰浴后再過(guò)柱子

贊一下

回復(fù)此樓

走別人的路讓別人無(wú)路可走

7樓2015-06-19 14:52:49

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

查看全部 13 個(gè)回答

博克儂浮碼

銀蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 7 (幼兒園)
金幣: 318.5
散金: 406
帖子: 107
在線: 47.4小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2814101
注冊(cè): 2013-11-20
專業(yè): 病原微生物變異與耐藥

【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
SDAUWY(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-06-19 20:41:09

多擴(kuò)幾管PCR，在回收過(guò)柱子的時(shí)候把離心后的液體再過(guò)一遍柱子，洗脫時(shí)也是，洗脫兩次，加的洗脫液量不要太大，我這樣做回收的時(shí)候濃度在100-300ng/ul左右

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2015-06-18 10:36:19

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

doudou_32

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 52.3
帖子: 5
在線: 3.6小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1349844
注冊(cè): 2011-07-19
性別: MM
專業(yè): 植物生殖生物學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
SDAUWY(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-06-19 20:41:17

如果你跑出來(lái)的帶是單一一條帶，可以試試PCR產(chǎn)物回收試劑盒，回收效率會(huì)高一些。

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2015-06-18 11:03:24

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

SDAUWY

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 141
帖子: 3
在線: 3.2小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2124788
注冊(cè): 2012-11-13
性別: GG
專業(yè): 昆蟲(chóng)學(xué)

引用回帖:

2樓: Originally posted by 博克儂浮碼 at 2015-06-18 10:36:19
多擴(kuò)幾管PCR，在回收過(guò)柱子的時(shí)候把離心后的液體再過(guò)一遍柱子，洗脫時(shí)也是，洗脫兩次，加的洗脫液量不要太大，我這樣做回收的時(shí)候濃度在100-300ng/ul左右

謝謝，我再試試，今天剛跑的PCR產(chǎn)物有500-600的濃度，按你的說(shuō)法做做試試看能回收到多少

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2015-06-18 15:54:09

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 306求調(diào)劑 +6	chuanzhu川燭 2026-03-18	6/300	2026-03-22 19:39 by 公瑾逍遙
[考研] 323求調(diào)劑 +5	洼小桶 2026-03-18	5/250	2026-03-22 17:38 by luoyongfeng
[基金申請(qǐng)] 山東省面上項(xiàng)目限額評(píng)審 +4	石瑞0426 2026-03-19	4/200	2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 326求調(diào)劑 +5	諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15	8/400	2026-03-21 19:33 by ColorlessPI
[考研] 【考研調(diào)劑】化學(xué)專業(yè) 281分，一志愿四川大學(xué)，誠(chéng)心求調(diào)劑 +11	吃吃吃才有意義 2026-03-19	11/550	2026-03-21 18:23 by 學(xué)員8dgXkO
[考研] 278求調(diào)劑 +9	煙火先于春 2026-03-17	9/450	2026-03-21 17:47 by 學(xué)員8dgXkO
[考研] 336求調(diào)劑 +5	rmc8866 2026-03-21	5/250	2026-03-21 17:24 by 學(xué)員8dgXkO
[基金申請(qǐng)] 學(xué)校已經(jīng)提交到NSFC，還能修改嗎？ 40+4	babangida 2026-03-19	9/450	2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 307求調(diào)劑 +10	冷笙123 2026-03-17	10/500	2026-03-21 01:54 by JourneyLucky
[考研] 材料 336 求調(diào)劑 +3	An@. 2026-03-18	4/200	2026-03-21 01:39 by JourneyLucky
[考研] 311求調(diào)劑 +5	冬十三 2026-03-18	5/250	2026-03-21 00:16 by JourneyLucky
[考研] 南京大學(xué)化學(xué)376求調(diào)劑 +3	hisfailed 2026-03-19	6/300	2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料求調(diào)劑，總分315（英一） +5	sbdksD 2026-03-19	5/250	2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 295材料求調(diào)劑，一志愿武漢理工085601專碩 +5	Charlieyq 2026-03-19	5/250	2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 261求B區(qū)調(diào)劑，科研經(jīng)歷豐富 +3	牛奶很忙 2026-03-20	4/200	2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +7	困于星晨 2026-03-17	9/450	2026-03-20 17:38 by 無(wú)懈可擊111
[考研] 求調(diào)劑 +3	暗涌afhb 2026-03-16	3/150	2026-03-20 00:28 by 河南大學(xué)校友
[考研] 288求調(diào)劑，一志愿華南理工大學(xué)071005 +5	ioodiiij 2026-03-17	5/250	2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 312求調(diào)劑 +8	陌宸希 2026-03-16	9/450	2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 070303 總分349求調(diào)劑 +3	LJY9966 2026-03-15	5/250	2026-03-16 14:24 by xwxstudy