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ggyy0911鐵蟲 (正式寫手)
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畢赤酵母菌落PCR篩選,這樣到底是轉(zhuǎn)化進去沒? 已有3人參與
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我做的GS115,用Takara的Direct PCR裂解液裂解菌落,然后做菌落PCR,一端通用引物,一端特異性引物P不出來條帶。 然后我用兩端特異性引物P,結(jié)果有的菌就P出目的條帶了。 最詭異的是我同時選了一個樣做兩端通用引物,P出了兩條帶,一條3K左右,一條淡淡的500bp,GS115本身有個條帶就在3Kb附近,空載載體能P出500bp的條帶,這樣的話這個樣就是空載咯?可是特異性引物P的時候,這個樣是有目的條帶的。 在我看來,用兩端通用引物;一端通用一端特異;兩端都特異;三種方法只要P出目的條帶,結(jié)果不都是一樣的嗎。不然目的條帶哪里來的,就算引物不夠特異,也不會剛好是目的條帶的大小啊。我目的條帶3kb,沒那么容易假陽性吧?次墨I很多人都寫用通用引物鑒定,那如果是我這種情況,到底是轉(zhuǎn)化了沒?P不出條帶又是什么原因呢? |
鐵蟲 (正式寫手)
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