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ggyy0911鐵蟲 (正式寫手)
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畢赤酵母菌落PCR篩選，這樣到底是轉(zhuǎn)化進(jìn)去沒？ 已有3人參與
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我做的GS115，用Takara的Direct PCR裂解液裂解菌落，然后做菌落PCR，一端通用引物，一端特異性引物P不出來(lái)?xiàng)l帶。 然后我用兩端特異性引物P，結(jié)果有的菌就P出目的條帶了。 最詭異的是我同時(shí)選了一個(gè)樣做兩端通用引物，P出了兩條帶，一條3K左右，一條淡淡的500bp，GS115本身有個(gè)條帶就在3Kb附近，空載載體能P出500bp的條帶，這樣的話這個(gè)樣就是空載咯？可是特異性引物P的時(shí)候，這個(gè)樣是有目的條帶的。 在我看來(lái)，用兩端通用引物；一端通用一端特異；兩端都特異；三種方法只要P出目的條帶，結(jié)果不都是一樣的嗎。不然目的條帶哪里來(lái)的，就算引物不夠特異，也不會(huì)剛好是目的條帶的大小啊。我目的條帶3kb，沒那么容易假陽(yáng)性吧。看文獻(xiàn)很多人都寫用通用引物鑒定，那如果是我這種情況，到底是轉(zhuǎn)化了沒？P不出條帶又是什么原因呢？ |
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