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ggyy0911鐵蟲 (正式寫手)
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[求助]
畢赤酵母菌落PCR篩選，這樣到底是轉(zhuǎn)化進去沒？ 已有3人參與
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我做的GS115，用Takara的Direct PCR裂解液裂解菌落，然后做菌落PCR，一端通用引物，一端特異性引物P不出來條帶。 然后我用兩端特異性引物P，結(jié)果有的菌就P出目的條帶了。 最詭異的是我同時選了一個樣做兩端通用引物，P出了兩條帶，一條3K左右，一條淡淡的500bp，GS115本身有個條帶就在3Kb附近，空載載體能P出500bp的條帶，這樣的話這個樣就是空載咯？可是特異性引物P的時候，這個樣是有目的條帶的。 在我看來，用兩端通用引物；一端通用一端特異；兩端都特異；三種方法只要P出目的條帶，結(jié)果不都是一樣的嗎。不然目的條帶哪里來的，就算引物不夠特異，也不會剛好是目的條帶的大小啊。我目的條帶3kb，沒那么容易假陽性吧。看文獻很多人都寫用通用引物鑒定，那如果是我這種情況，到底是轉(zhuǎn)化了沒？P不出條帶又是什么原因呢？ |
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4樓2015-07-15 08:17:24
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