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小鼴鼠木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
為什么兩次PCR做的結(jié)果不一致？ 已有3人參與
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| 篩雙交換的，第一遍PCR有條帶，第二遍PCR重復(fù)，結(jié)果就沒(méi)有條帶了。這是什么原因呢？我肯定沒(méi)加錯(cuò)樣。。太坑了…… |
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2樓2015-08-07 08:23:14
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 淡定淡定，正常，二次PCR本身錯(cuò)配就較高，因此總是會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題，只能想辦法提高擴(kuò)增的特異性了，可以看看這篇文章（http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html）此外注意上樣量，二次擴(kuò)增模板要稀釋1000倍左右也很重要，好運(yùn)嘍~ |
3樓2015-08-07 09:43:10
小鼴鼠
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4樓2015-08-10 19:25:53
布za
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6樓2015-08-14 09:48:44
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【答案】應(yīng)助回帖
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分子生物本身就看不見(jiàn)摸不著啊，存在很大偶然性的，上午做有，下午沒(méi)有條帶，也可能是上午溫度低，下午溫度又高了呢，或者是加樣時(shí)間長(zhǎng)了一點(diǎn)點(diǎn)，這樣溫度時(shí)間的輕微變化都會(huì)引起酶等其他的活性變化啊，當(dāng)然只是針對(duì)普通的Taq酶，如果是熱啟動(dòng)酶就不會(huì)啦~ |
7樓2015-08-31 16:39:03
DT0221
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8樓2015-08-31 17:06:53
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9樓2015-09-01 09:03:54
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