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呂稀稀子新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
DH5a大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞 已有6人參與
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DH5a大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞 CaCl2法總是做失敗， 兩次過(guò)夜活化實(shí)驗(yàn)室保存的菌株，取3ml活化好的菌液加入300ml新鮮LB液體培養(yǎng)基中，搖菌3小時(shí)左右，分裝50ml一管，冰浴10min,4℃，6000rpm離心10min,棄上清，用6ml 0.1mol/L cacl2-mgcl2重懸, 冰浴10min,4℃，6000rpm離心10min,棄上清，再用0.4ml 0.1mol/L cacl2重懸,0.06ml無(wú)菌甘油，使之終濃度為15%，分裝為0.01ml小管， -70℃保存。 使用了6支自制的感受態(tài)，加入連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化后，離心發(fā)現(xiàn)沉淀挺多，涂板前發(fā)現(xiàn)混勻的菌液是乳白色，過(guò)夜培養(yǎng)總是長(zhǎng)出成片的塊斑，懷疑是制作感受態(tài)失敗，求解答～謝謝 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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此現(xiàn)象存在以下問(wèn)題，1:感受態(tài)做的太好了，或者說(shuō)轉(zhuǎn)化率太高，可以取部分轉(zhuǎn)化菌液涂板。2.有沒(méi)有用液氮速凍后放于70度冰箱，這樣更好。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
3樓2015-11-30 15:00:05
yspain
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4樓2015-12-03 00:03:18
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5樓2015-12-03 08:46:28
【答案】應(yīng)助回帖
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個(gè)人覺(jué)得可以直接將感受態(tài)涂在抗性板上看看制備的感受態(tài)怎樣。另外看轉(zhuǎn)化效率可以先用質(zhì)粒做轉(zhuǎn)化試一下效率。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
6樓2015-12-03 09:07:22
呂稀稀子
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制備好的感受態(tài)有做正負(fù)對(duì)照嗎？ 就是轉(zhuǎn)1 ng對(duì)照質(zhì)粒和空白對(duì)照涂到對(duì)應(yīng)抗性的板上那種。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
10樓2015-12-05 14:45:21
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