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呂稀稀子新蟲 (初入文壇)
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[求助]
DH5a大腸桿菌感受態(tài)細胞 已有6人參與
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DH5a大腸桿菌感受態(tài)細胞 CaCl2法總是做失敗, 兩次過夜活化實驗室保存的菌株,取3ml活化好的菌液加入300ml新鮮LB液體培養(yǎng)基中,搖菌3小時左右,分裝50ml一管,冰浴10min,4℃,6000rpm離心10min,棄上清,用6ml 0.1mol/L cacl2-mgcl2重懸, 冰浴10min,4℃,6000rpm離心10min,棄上清,再用0.4ml 0.1mol/L cacl2重懸,0.06ml無菌甘油,使之終濃度為15%,分裝為0.01ml小管, -70℃保存。 使用了6支自制的感受態(tài),加入連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化后,離心發(fā)現(xiàn)沉淀挺多,涂板前發(fā)現(xiàn)混勻的菌液是乳白色,過夜培養(yǎng)總是長出成片的塊斑,懷疑是制作感受態(tài)失敗,求解答~謝謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
新蟲 (小有名氣)
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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此現(xiàn)象存在以下問題,1:感受態(tài)做的太好了,或者說轉(zhuǎn)化率太高,可以取部分轉(zhuǎn)化菌液涂板。2.有沒有用液氮速凍后放于70度冰箱,這樣更好。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

新蟲 (初入文壇)
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