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雙酶切為什么會(huì)切出來這么多條帶？ 已有3人參與
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我是對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切，用的是BamH I 和EcoR V這兩個(gè)酶，采用20微升酶切體系。Marker 是15000的，四個(gè)樣的雙酶切目的條帶在1650bp左右的位置，最右側(cè)的一個(gè)是對(duì)照，對(duì)照質(zhì)粒酶切下來的條帶是400bp左右。為什么我得到的重組質(zhì)粒雙酶切會(huì)出現(xiàn)這么多條帶的情況？該如何避免？單酶切一切正常。第二個(gè)圖是單酶切。 雙酶切1o 2016-03-10 21 時(shí) 05 分.jpg EcoRV單酶切條帶 5號(hào)112016-03-10 18 時(shí) 46 分.jpg |
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陳碩5樓2016-03-11 08:56:51
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我們實(shí)驗(yàn)室自己重建的質(zhì)粒。感覺我后期再加工加工可以做marker當(dāng)商品賣了，到時(shí)候給你五折優(yōu)惠，哈哈。我也不知道為啥，出發(fā)質(zhì)粒好好的，要說雙酶切咋會(huì)這么多長(zhǎng)度區(qū)間都有條帶呢？想不通，找不到原因。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2016-03-11 17:56:28
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會(huì)不會(huì)和你抽的質(zhì)粒有關(guān)系啊，我們實(shí)驗(yàn)室之前就有同學(xué)抽質(zhì)粒出現(xiàn)問題，雙酶切時(shí)就出現(xiàn)好幾條雜條帶。后來重新抽了質(zhì)粒再去雙酶切就好了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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14樓2016-03-12 00:22:54
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如果擔(dān)心你的酶切位點(diǎn)有問題，你可以在質(zhì)粒那個(gè)酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)一個(gè)引物，將質(zhì)粒拿去用引物測(cè)個(gè)序，就知道位點(diǎn)有沒有問題了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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17樓2016-03-12 15:31:31
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4樓2016-03-11 08:44:35
ken19860823
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6樓2016-03-11 09:28:57
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也是用這兩個(gè)酶。好糾結(jié)啊，BamH I之前酶切不成功，感覺像是這個(gè)酶切位點(diǎn)出了問題。讓我不明白的是就算那個(gè)位點(diǎn)出問題，那該怎么解釋雙酶切時(shí)出來這么多條帶。這兩天快被整瘋了，想不明白。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2016-03-11 14:53:17
8樓2016-03-11 14:54:28
ken19860823
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9樓2016-03-11 15:45:45
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