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leisure93新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
長(zhǎng)bp的片段的連接問(wèn)題。 已有3人參與
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目的基因片段長(zhǎng)度11kb左右。為了把他擴(kuò)出來(lái) 分成了三段。part-1.2.3。part-1前段加入啟動(dòng)子。末端加了三個(gè)酶切位點(diǎn)。在part-2中加了幾個(gè)內(nèi)含子。part-3加了個(gè)熒光蛋白。現(xiàn)在part1.2.3都擴(kuò)出來(lái)了，也驗(yàn)證過(guò)了，本來(lái)是想part-1.和part-2先連接后和part3連接�？墒莗art1.2的連接一直不成功。導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)沒(méi)法繼續(xù)進(jìn)行，選用的是T-1載體。其中一些假陽(yáng)性 連接時(shí)長(zhǎng) 等問(wèn)題都排除過(guò)了，也換過(guò)短的質(zhì)粒 一直沒(méi)能連接成功。重新加酶切位點(diǎn)也不太可能了，求助是不是長(zhǎng)bp的片段鏈接應(yīng)該需要注意什么？ part1.2.3的長(zhǎng)度大約在2700 4000 4400左右。求助啊 @biostar2009 @飛約瘋?cè)嗽?/u> @wizardfan 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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kangaroo0513
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6樓2016-05-03 14:01:17
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我用的也是這一系列產(chǎn)品。是MAX保真性比你這個(gè)還高一些。就怕基因突變不好檢測(cè)。MAX是23w9個(gè)的準(zhǔn)確率。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
7樓2016-05-03 17:25:01
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8樓2016-05-04 00:22:54
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9樓2016-05-05 10:33:02
10樓2016-05-05 19:50:48
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