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leisure93新蟲 (初入文壇)
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[求助]
長bp的片段的連接問題。 已有3人參與
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目的基因片段長度11kb左右。為了把他擴出來 分成了三段。part-1.2.3。part-1前段加入啟動子。末端加了三個酶切位點。在part-2中加了幾個內(nèi)含子。part-3加了個熒光蛋白。現(xiàn)在part1.2.3都擴出來了，也驗證過了，本來是想part-1.和part-2先連接后和part3連接。可是part1.2的連接一直不成功。導(dǎo)致實驗沒法繼續(xù)進(jìn)行，選用的是T-1載體。其中一些假陽性 連接時長 等問題都排除過了，也換過短的質(zhì)粒 一直沒能連接成功。重新加酶切位點也不太可能了，求助是不是長bp的片段鏈接應(yīng)該需要注意什么？ part1.2.3的長度大約在2700 4000 4400左右。求助啊 @biostar2009 @飛約瘋?cè)嗽?/u> @wizardfan 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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kangaroo0513
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