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山水506銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
western blot 出不來結(jié)果！��！
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各位達(dá)人，我剛開始做western，不過也做過好多次了，每一次要么是什么都沒有，要么是有若隱若現(xiàn)的條帶，結(jié)果總是不好。請(qǐng)問是怎么回事��？ PS：用考馬斯亮藍(lán)染色，發(fā)現(xiàn)膠上基本沒有蛋白了，可在曝光后用麗春紅染膜后沒有發(fā)現(xiàn)蛋白條帶，但在網(wǎng)上查，說有的沒染出來也能做出來��！ 謝謝各位了~~  |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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山水506: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝了 2012-11-07 21:21:42
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Western是要比考染敏感，肉眼看不到的條帶也wetstern可出條帶。我覺得樓主的問題可以進(jìn)行以下嘗試： 1.可以同時(shí)跑兩塊一樣的膠，一塊直接考染，一塊轉(zhuǎn)膜后考染，進(jìn)行一下對(duì)比； 2.買個(gè)預(yù)染蛋白Marker一起跑、轉(zhuǎn),這樣轉(zhuǎn)沒轉(zhuǎn)過去，一目了然，國(guó)產(chǎn)的預(yù)染Marker也不貴； 3.膠上蛋白沒了，麗春紅膜上沒染出來，是不是轉(zhuǎn)過了，直接到膜底下的濾紙上去了，用PVDF膜要好些。 以上僅供參考，祝實(shí)驗(yàn)順利，呵呵。 |
3樓2012-11-03 14:48:02
wenzonglu
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xiaoqi5992
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5樓2012-11-05 09:27:29
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