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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 相對熒光定量PCR
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crazymouse66金蟲 (正式寫手)
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[求助]
相對熒光定量PCR
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各位蟲友，麻煩大家?guī)臀铱匆幌拢易龅脑囋嚐晒舛縋CR，其中溶解曲線都還可以，但是擴增曲線為什么會出現(xiàn)那種情況呢？真的不是很明白，請大家指導一下。其中我做了60個循環(huán)，里面初始的cDNA含量是9ng。 擴增曲線.jpg 溶解曲線.jpg |
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cicelyzh
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9樓2013-07-03 23:15:31
cicelyzh
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| 做60個循環(huán)也太多了吧。我懷疑你擴增的是什么。一般定量PCR的程序跑40或者45個循環(huán)。CT的最佳范圍是15-30。你的熔解曲線好像也有問題。熔解溫度太低，一般產物峰的熔解溫度在80°C以上，七十多度的一般都是引物二聚體。你擴增的是用RNA反轉錄得到的第一鏈cDNA嗎？ |
2樓2013-07-03 00:21:23
crazymouse66
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3樓2013-07-03 08:48:09
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