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科技廣場(chǎng)銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
原核表達(dá)誘導(dǎo)蛋白
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| 請(qǐng)問(wèn)大家原核表達(dá)誘導(dǎo)蛋白時(shí)用的IPTG濃度是多少?,跑SDS-PAGE電泳的時(shí)候,菌體破碎后上清跟菌體分開(kāi)分別上樣嗎?謝謝 |
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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37度 3-4小時(shí)誘導(dǎo),可以1mM,這樣表達(dá)會(huì)快點(diǎn),但是前提是你的蛋白不是說(shuō)很么特殊的蛋白 16度過(guò)夜的話,一般都是0.5mM以下了,因?yàn)橐獪睾驼T導(dǎo)。 iptg過(guò)量會(huì)影響你的蛋白表達(dá),有時(shí)候還會(huì)抑制,所以要慎用! 跑SDS-PAGE電泳的時(shí)候,菌體破碎后上清跟菌體分開(kāi)分別上樣,因?yàn)檫@是判斷你的蛋白是否可溶的標(biāo)準(zhǔn),所以需要的。 |

新蟲(chóng) (初入文壇)
銅蟲(chóng) (小有名氣)
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