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zishilanxuan金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
蛋白電泳能跑出帶來(lái)，但是測(cè)不出酶活
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請(qǐng)教各位大神一個(gè)問(wèn)題，我現(xiàn)在蛋白電泳能跑出我要的條帶，但是酶活測(cè)不出來(lái)，大家有沒(méi)有遇到這個(gè)問(wèn)題的？謝謝指教…… |
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alarace
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| 不知道你的蛋白是原核表達(dá)的還是從組織中分離純化的？也不知道你的蛋白是人源還是其它物種的？不管怎么樣都應(yīng)該先用western blotting證明那個(gè)是你的蛋白，最好用蛋白的特異抗體，表達(dá)的蛋白也可以用蛋白上帶有的標(biāo)簽抗體。確認(rèn)是你的蛋白了才能往后做。只通過(guò)跑膠看大小不能說(shuō)明問(wèn)題。分離純化過(guò)程蛋白容易變性失活，分離純化的方法不合適蛋白測(cè)不出來(lái)活性很正常。原核表達(dá)的蛋白沒(méi)有活性更正常。原核表達(dá)的真核來(lái)源蛋白不能進(jìn)行正確的修飾、折疊和加工，沒(méi)活性太常見(jiàn)了。 |
4樓2013-09-30 14:17:08
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| 先用western確定你觀察到的條帶是否就是目的蛋白。如果是，證明有表達(dá)。表達(dá)出的蛋白是否有活性是另一個(gè)問(wèn)題了。首先你表達(dá)的蛋白是否是天然形式，你是否加了標(biāo)簽。有時(shí)候加了標(biāo)簽也會(huì)影響蛋白的活性和生物功能。其次，你分離蛋白樣品時(shí)是否采用的是非變性條件。如果是過(guò)表達(dá)，是否形成了包涵體。你的目的蛋白是否需要結(jié)合輔助因子才有活性。 |
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8樓2013-10-02 20:07:42
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