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zishilanxuan金蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白電泳能跑出帶來，但是測(cè)不出酶活
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請(qǐng)教各位大神一個(gè)問題，我現(xiàn)在蛋白電泳能跑出我要的條帶，但是酶活測(cè)不出來，大家有沒有遇到這個(gè)問題的？謝謝指教…… |
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5樓2013-09-30 21:59:34
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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gyesang: 回帖置頂 2013-09-30 17:28:44
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| 不知道你的蛋白是原核表達(dá)的還是從組織中分離純化的？也不知道你的蛋白是人源還是其它物種的？不管怎么樣都應(yīng)該先用western blotting證明那個(gè)是你的蛋白，最好用蛋白的特異抗體，表達(dá)的蛋白也可以用蛋白上帶有的標(biāo)簽抗體。確認(rèn)是你的蛋白了才能往后做。只通過跑膠看大小不能說明問題。分離純化過程蛋白容易變性失活，分離純化的方法不合適蛋白測(cè)不出來活性很正常。原核表達(dá)的蛋白沒有活性更正常。原核表達(dá)的真核來源蛋白不能進(jìn)行正確的修飾、折疊和加工，沒活性太常見了。 |
4樓2013-09-30 14:17:08
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