 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 存檔舊帖 » 雙酶切問題，跪求指導啊
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1907 | 回復: 5 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
雙酶切問題，跪求指導啊
|
|||
各位大牛，誰來幫幫我啊，我最近做雙酶切，目的片段500左右，連載pmd18-simple-t載體上，用的是NEB公司的not1和bamh1兩個酶進行酶切，測序序列正確，可是not1就是切不動，not1我已經驗證過了好用，什么單切，過夜切,都試過了，我用的是20ul體系酶各加0.5,單切10ul,20ul都用過了，。。。神了啊 ，這種情況我改怎么辦啊 |
回復此樓» 猜你喜歡
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有83人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
-
留學--博士招生
已經有6人回復
-
化學工程，本211，求調劑，ab區(qū)不限
已經有3人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- Sac1和Xho1的雙酶切連接
已經有5人回復
- 糾結的分子實驗，雙酶切連不上，求助
已經有14人回復
- 雙酶切buffer加多了
已經有6人回復
- 關于雙酶切后回收的問題
已經有12人回復
- PCR產物雙酶切遇到問題，求救�。�！
已經有7人回復
- 雙酶切沒有切開，怎么回事啊
已經有6人回復
- 關于XhoI和SacI雙酶切的問題
已經有8人回復
- 雙酶切后目的條帶的疑問？
已經有8人回復
- 小片段雙酶切求助，急急急
已經有18人回復
- 求助關于雙酶切空載跑膠沒有條帶！
已經有15人回復
- 雙酶切啥都沒有？
已經有10人回復
- PET-32a雙酶切無法回收
已經有8人回復
- 雙酶切，切不下來
已經有19人回復
- 雙酶切，體系，切不出來
已經有10人回復
- 求助 雙酶切驗證陽性克隆的問題
已經有12人回復
- 雙酶切連接表達載體，兩個月都沒做出來，問題到底出在哪里呢~？求指點
已經有52人回復
- 雙酶切時間怎么確定
已經有9人回復
- 【求助/交流】關于雙酶切
已經有6人回復
- 【求助/交流】相鄰酶切位點的雙酶切
已經有7人回復
- 【求助/交流】雙酶切求助
已經有19人回復
- 【求助/交流】雙酶切質粒后，目的條帶淺且前方有模糊亮帶
已經有12人回復
leonaliu2013
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 27 (小學生)
- 金幣: 1710.5
- 散金: 2850
- 紅花: 4
- 帖子: 1527
- 在線: 83.1小時
- 蟲號: 2601361
- 注冊: 2013-08-14
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
【答案】應助回帖
★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2013-10-08 17:22:27
感謝參與，應助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2013-10-08 17:22:27
| 你的描述不太清楚，你說Not1好用，指的是你用這個酶單切切的是你這個片段，還是只是為了驗證這個酶是否好用而切得其他帶有Not1酶切位點的片段。如果你切的是你自己的片段，那么單酶切能切開，雙酶切切不開，那么你要考慮你用的buffer和反應條件是否不適合Not1，但是如果你的意思是你只是單純的驗證了你的Not1好用，而用這個酶切不開你的片段，那么建議你只用Not1單酶切，如果切不開那么是引物合成的公司可能給你合成錯了酶切位點。我遇到過這種情況 |
4樓2013-10-08 17:17:41
panda73
金蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 3
- 應助: 80 (初中生)
- 金幣: 1201.3
- 散金: 44
- 紅花: 2
- 帖子: 191
- 在線: 42.5小時
- 蟲號: 985964
- 注冊: 2010-03-30
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
【答案】應助回帖
★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2013-10-08 17:22:10
感謝參與，應助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2013-10-08 17:22:10
|
你說得不是很清楚。我的理解是： 你已經將500bp的片段克隆至載體pmd-simple-t了，現(xiàn)在準備用NotI+BamHI將此500bp片段切下來（可能準備亞克隆？），問題出在雙酶切上，對吧？ 如果上述推測正確，那么我建議你先對你的質粒DNA進行定量，然后各取1ugDNA,分別用NotI或BamHI進行單酶切，看看此兩個酶切位點是否都能成功進行單切。（質粒成功進行單酶切后電泳的帶型與未酶切的質粒不一樣，電泳可以明顯分辨）。 然后再考慮雙酶切。 酶切時的兩種酶的具體用量，我建議你利用double digestion designer(http://www.bioinfomatics.cn/enzyme/login.php)進行計算，不要隨意估計，以確保完全酶切或者不會因酶量過多而出現(xiàn)酶的星活性。 |
2樓2013-10-08 16:55:27
sxxuan
金蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 4
- 應助: 107 (高中生)
- 金幣: 3442.4
- 散金: 104
- 紅花: 17
- 帖子: 1478
- 在線: 266.1小時
- 蟲號: 512865
- 注冊: 2008-02-27
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學
3樓2013-10-08 17:16:03
5樓2013-10-08 17:19:47
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 北科281學碩材料求調劑 +9 | tcxiaoxx 2026-03-20 | 11/550 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 網絡空間安全0839招調劑 +3 | w320357296 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 085602 289分求調劑
+7
|
WWW西西弗斯 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料學碩333求調劑 +4 | 北道巷 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 293求調劑 +7 | 加一一九 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料調劑 +3 | iwinso 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 生物技術與工程 +3 | 1294608413 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 086003食品工程求調劑 +6 | 淼淼111 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 07化學280分求調劑 +7 | 722865 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 340求調劑 +5 | 話梅糖111 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
材料考研調劑生
+3
|
黃粱一夢千年 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 080500求調劑 +3 | zzzzfan 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請] 請教下大家 2026年國家基金申請是雙盲審嗎？ +3 | lishucheng1 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料/農業(yè)專業(yè)，07/08開頭均可，過線就行 +3 | 呵唔哦豁 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海交大生物與醫(yī)藥專碩324分，求調劑 +5 | jiajunX 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 293求調劑 +3 | 濤濤Wjt 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調劑 +4 | 幸運的醬醬 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +7 | Auroracx 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求 B區(qū) 調劑 +3 | 邱gl 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +3 | eation27 2026-03-20 | 3/150 |
|