 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 7724 | 回復(fù): 24 | |||
963979587銀蟲 (初入文壇)
|
[求助]
實(shí)時(shí)熒光定量pcr，cDNA的加入量會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確度嗎？
|
||
| 大家好，最近一直做熒光定量pcr，20ul體系中3ug的rna反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA，取4ul作為pcr的模板，10ul EvaGreen，4ul引物，2ulRNas水，這個(gè)體系可以得到挺好的結(jié)果，但是溶解曲線的溫度在77°，不知道是不是引物二聚體，而且我覺(jué)得模板的量加的太多了，實(shí)驗(yàn)不能重復(fù)，一次就用光了，不知道是不是應(yīng)該稀釋一下？ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 QPCR實(shí)驗(yàn)困惑 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有110人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 實(shí)時(shí)熒光定量PCR過(guò)程問(wèn)題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 求助熒光定量引物驗(yàn)證？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求助：相對(duì)定量qRT-PCR，需要定量mRNA或者cDNA嗎？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 熒光定量PCR與巢式PCR能結(jié)合嗎？主要怕擴(kuò)增出同源基因。
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 熒光定量pcr,以及內(nèi)參基因的選擇。
已經(jīng)有4人回復(fù)
- PCR時(shí) DNA模版過(guò)多會(huì)影響PCR的結(jié)果嗎？？
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 熒光定量PCR-絕對(duì)定量
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 求助熒光定量PCR統(tǒng)計(jì)方法
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 做熒光定量PCR操作必須要在冰上進(jìn)行嗎？
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 熒光定量PCR結(jié)果如何處理
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 求解：實(shí)時(shí)熒光定量PCR奇峰
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 相對(duì)定量熒光PCR結(jié)果分析中的SD如何計(jì)算？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 合適的熒光定量PCR管
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 熒光定量PCR
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 熒光定量PCR的模板濃度
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 熒光定量PCR cDNA怎么定量�。�
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 熒光定量PCR(相對(duì)定量)的分析結(jié)果2-△△Ct怎么看呀?
已經(jīng)有31人回復(fù)
- 【求助/交流】RNA 熒光定量
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】普通PCR和熒光實(shí)時(shí)定量PCR為何結(jié)果不同？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于做熒光定量pcr的模板問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于熒光定量PCR中cdna合成的問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】實(shí)時(shí)熒光定量PCR的擴(kuò)增效率低該如何改進(jìn)？
已經(jīng)有5人回復(fù)
3樓2013-10-14 23:29:42
taccycle
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
- 金幣: 112.9
- 帖子: 60
- 在線: 19.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 2364578
- 注冊(cè): 2013-03-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 遺傳學(xué)研究新技術(shù)與方法
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
1、把cDNA稀釋10倍的話其Ct值才增大3.2左右，只要你的Ct最后能落在33以內(nèi)機(jī)器檢測(cè)的準(zhǔn)確度就沒(méi)有什么影響，所以只要你目的基因的Ct值在30以內(nèi)，你就可以大膽放心的稀釋，你可以先稀釋5倍測(cè)試一下。 2、檢測(cè)有沒(méi)有引物二聚體你可以配一個(gè)3%的瓊脂糖膠把PCR產(chǎn)物跑一個(gè)電泳，選擇一個(gè)合適的Marker，比如DL500，引物二聚體一般都小于100bp，如果只有一條size正確的條帶，那就說(shuō)明沒(méi)有引物二聚體 3、Tm值不能說(shuō)明這個(gè)峰是不是引物二聚體，我的目的條帶的Tm有的只有75℃ 4、模板用量不會(huì)影響定量結(jié)果（只要不是那種極端用量），這是理論上決定的，就算有影響也是微乎其微的 |
13樓2013-10-16 16:24:57
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2013-10-14 22:31:01
963979587
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 665.8
- 帖子: 31
- 在線: 40小時(shí)
- 蟲號(hào): 1344134
- 注冊(cè): 2011-07-12
- 專業(yè): 藥理學(xué)其他科學(xué)問(wèn)題
4樓2013-10-15 10:20:26
6樓2013-10-15 15:51:55
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
8樓2013-10-15 22:12:45
9樓2013-10-16 00:29:32
10樓2013-10-16 00:31:36
11樓2013-10-16 11:03:17
12樓2013-10-16 11:04:59
963979587
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 665.8
- 帖子: 31
- 在線: 40小時(shí)
- 蟲號(hào): 1344134
- 注冊(cè): 2011-07-12
- 專業(yè): 藥理學(xué)其他科學(xué)問(wèn)題
15樓2013-10-16 20:54:33
taccycle
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
- 金幣: 112.9
- 帖子: 60
- 在線: 19.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 2364578
- 注冊(cè): 2013-03-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 遺傳學(xué)研究新技術(shù)與方法
18樓2013-10-17 11:25:18
沙門小rna
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 28 (小學(xué)生)
- 金幣: 1117.7
- 散金: 5
- 紅花: 6
- 沙發(fā): 6
- 帖子: 644
- 在線: 76.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 2012528
- 注冊(cè): 2012-09-19
- 專業(yè): 病原細(xì)菌、細(xì)菌感染與宿主
19樓2013-10-18 16:50:54
963979587
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 665.8
- 帖子: 31
- 在線: 40小時(shí)
- 蟲號(hào): 1344134
- 注冊(cè): 2011-07-12
- 專業(yè): 藥理學(xué)其他科學(xué)問(wèn)題
5樓2013-10-15 10:22:46
963979587
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 665.8
- 帖子: 31
- 在線: 40小時(shí)
- 蟲號(hào): 1344134
- 注冊(cè): 2011-07-12
- 專業(yè): 藥理學(xué)其他科學(xué)問(wèn)題
7樓2013-10-15 22:01:58
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 963979587 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 070300化學(xué)319求調(diào)劑 +4 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085601材料工程專碩求調(diào)劑 +4 | 慕寒mio 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +9 | 負(fù)心者當(dāng)誅 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 有沒(méi)有道鐵/土木的想調(diào)劑南林，給自己招師弟中～ +3 | TqlXswl 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | Yy7400 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3 | 藥學(xué)chy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +4 | 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 0703方向310分求調(diào)劑 +3 | 努力奮斗112 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +6 | 妮妮ninicgb 2026-03-15 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +5 | d如愿上岸 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +3 | 劉夢(mèng)微 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22408總分284求調(diào)劑 +3 | InAspic 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 255求調(diào)劑 +3 | 李嘉慧， 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 【0703化學(xué)調(diào)劑】-一志愿華中師范大學(xué)-六級(jí)475 +5 | Becho359 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703，333分求調(diào)劑 一志愿鄭州大學(xué)-物理化學(xué) +3 | 李魔女斗篷 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)學(xué)校調(diào)劑 +3 | 周56 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 18880831720 2026-03-11 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料專碩350 求調(diào)劑 +4 | 王金科 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 資源與環(huán)境 285 +3 | 未名考生 2026-03-10 | 3/150 |
|