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再見(jiàn)螢火蟲(chóng)89銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
反轉(zhuǎn)錄的cDNA沒(méi)問(wèn)題，但是實(shí)時(shí)定量PCR卻不行。內(nèi)參擴(kuò)不出來(lái)啊。 已有4人參與
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反轉(zhuǎn)錄RNA，用得到的cDNA做了實(shí)時(shí)定量。cDNA的濃度結(jié)果都可以，260/280約為1.8，260/230約為2.2~2.38，濃度為1300~1500ng/ul.測(cè)濃度時(shí)的峰值也正常，只有260nm處有峰。但是，問(wèn)題是，有的cDNA能正常擴(kuò)增出內(nèi)參基因，有的擴(kuò)不出來(lái)。補(bǔ)充一下，內(nèi)參沒(méi)問(wèn)題。這是什么原因�。吭趺唇鉀Q�。壳拜厒�，請(qǐng)教。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] [ Last edited by 再見(jiàn)螢火蟲(chóng)89 on 2013-12-26 at 14:46 ] |
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再見(jiàn)螢火蟲(chóng)89: 金幣+5, ★有幫助 2013-12-26 15:43:12
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再見(jiàn)螢火蟲(chóng)89: 金幣+5, ★有幫助 2013-12-26 15:43:12
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"cDNA的濃度結(jié)果都可以，260/280約為1.8~1.9，260/230約為2.2~2.3，濃度為1300~1500ng/ul.測(cè)濃度時(shí)的峰值也正常，只有260nm處有峰。" 一般是不測(cè)定cDNA濃度的，即使你測(cè)出值來(lái)也是不準(zhǔn)確的，沒(méi)有參考意義 cDNA的好壞取決于你做逆轉(zhuǎn)錄時(shí)的模板的質(zhì)量和逆轉(zhuǎn)錄的過(guò)程，一般我們控制RNA的質(zhì)量，判定RNA的濃度，純度和完整度后不同樣本取同量RNA做逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，然后再去等量cDNA去做realtime 現(xiàn)在你的問(wèn)題是，有的cDNA能正常擴(kuò)增出內(nèi)參基因，有的擴(kuò)不出來(lái)，我覺(jué)得可能還是你的擴(kuò)不出來(lái)的那些樣品的RNA提取的有問(wèn)題，你可以check一下RNA，后再做判斷 |
3樓2013-12-26 14:50:24
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2樓2013-12-26 14:47:54
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4樓2013-12-26 15:43:00
cicelyzh
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