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目的片段和載體連接一直不上 已有7人參與
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1、目的片段738bp(兩端帶酶切位點),載體選擇pCAMBIA3301,酶切位點選擇Nco I和BstE II。載體確定已經(jīng)雙酶切開來,目的片段應(yīng)該也雙酶切成功(電泳圖片看不出來)。用的Promega的T4連接酶,載體和目的片段摩爾比1:5,反應(yīng)體系20ul,22℃連接3.5小時,轉(zhuǎn)化至DH5α,未出現(xiàn)菌落。 2、也有說將目的片段和T載體先連接,然后再和表達載體連接,這樣更容易連上。原理是什么,不懂。 感謝您的幫助。 |

木蟲 (著名寫手)
木蟲 (正式寫手)

銅蟲 (小有名氣)

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