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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 核酸雜交 » 目的片段和載體連接一直不上
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目的片段和載體連接一直不上 已有7人參與
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1、目的片段738bp（兩端帶酶切位點）,載體選擇pCAMBIA3301,酶切位點選擇Nco I和BstE II。載體確定已經(jīng)雙酶切開來，目的片段應該也雙酶切成功（電泳圖片看不出來）。用的Promega的T4連接酶，載體和目的片段摩爾比1:5，反應體系20ul，22℃連接3.5小時，轉(zhuǎn)化至DH5α，未出現(xiàn)菌落。 2、也有說將目的片段和T載體先連接，然后再和表達載體連接，這樣更容易連上。原理是什么，不懂。 感謝您的幫助。 |
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