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lilylil

鐵蟲(chóng) (初入文壇)

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[求助] 雙酶切問(wèn)題，急~ 已有18人參與

本人現(xiàn)在用Not I 和EcoR I 雙酶切，目的片段60bp,載體是PUC57總是顯示一條帶，用酶各自單切都可切開(kāi)，用的是Takara的酶。
反應(yīng)體系1μl Not I
            1μl EcoR I
            4μl 0.1% BSA
            4μl 10×H
            25μl 質(zhì)粒（≤1μg）
            5μl 水
37℃，3h
現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)就卡在這了，很急請(qǐng)大家多多指導(dǎo)

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1樓 2015-05-04 16:27:42

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wangranjun

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廣庭之惘然

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西門(mén)吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-05-04 23:20:02

可以嘗試一下高濃度的膠，不過(guò)中間片段只有60bp的話很難看出來(lái)……可以用沒(méi)有切過(guò)的載體做對(duì)照。祝順利！

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他日揚(yáng)翼九萬(wàn)里，歷大千世界，定我紅塵心！

3樓2015-05-04 16:53:05

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781055707

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【答案】應(yīng)助回帖

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我切過(guò)80BP的，跑電泳看不出來(lái)，但質(zhì)粒確實(shí)切開(kāi)了，后來(lái)也連上了。

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采菊東籬下，悠然見(jiàn)南山。

2樓2015-05-04 16:41:56

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沉默的獨(dú)角獸

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會(huì)不會(huì)是兩個(gè)酶切位點(diǎn)靠得太近？

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4樓2015-05-04 18:04:15

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匿名

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5樓2015-05-04 18:11:40

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