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我是丫丫木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
純化蛋白，蛋白分子量比較大，先過(guò)鎳柱之后，之后做離子交換色譜還是超濾比較好
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| 我第一次純化分子量很大的蛋白，有HIS標(biāo)簽，所以打算先過(guò)鎳柱，然后透析出鹽，接下來(lái)是用超濾比較好還是離子交換色譜好還是其余的方法？沒(méi)有做過(guò)離子交換色譜，求蟲(chóng)友建議，多謝，哪個(gè)成本比較低~ |
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2樓2015-05-21 11:33:11
mataomatao
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-05-21 22:59:32
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-05-21 22:59:32
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3樓2015-05-21 20:50:28
xscljl
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
我是丫丫: 金幣+1 2015-05-24 10:50:57
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
我是丫丫: 金幣+1 2015-05-24 10:50:57
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你該先看看經(jīng)過(guò)Ni-柱純化后的蛋白純度和濃度（即透析除鹽后跑個(gè)SDS-PAGE，考馬斯亮藍(lán)染一下色，看看有沒(méi)有雜帶）。如果雜帶較多，且分子量與目的蛋白差別不是很大，超濾沒(méi)效果；若雜帶較少，目的蛋白濃度還行，跟著你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊�，確定是否有必要繼續(xù)濃縮或純化；有一點(diǎn)是離子交換前，上樣蛋白濃度最好大一些，之后流出液蛋白濃度才能盡量符合你的要求。 總之，需要跟著你的實(shí)驗(yàn)要求和蛋白本身的可溶性確定用什么方法純化。 |
4樓2015-05-24 07:12:58
3q2002
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5樓2015-05-24 09:04:45
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