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我是丫丫木蟲 (正式寫手)
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[交流]
純化蛋白，蛋白分子量比較大，先過鎳柱之后，之后做離子交換色譜還是超濾比較好
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| 我第一次純化分子量很大的蛋白，有HIS標(biāo)簽，所以打算先過鎳柱，然后透析出鹽，接下來是用超濾比較好還是離子交換色譜好還是其余的方法？沒有做過離子交換色譜，求蟲友建議，多謝，哪個(gè)成本比較低~ |
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lomis
木蟲 (正式寫手)
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2樓2015-05-21 11:33:11
mataomatao
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3樓2015-05-21 20:50:28
xscljl
銀蟲 (初入文壇)
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我是丫丫: 金幣+1 2015-05-24 10:50:57
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我是丫丫: 金幣+1 2015-05-24 10:50:57
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你該先看看經(jīng)過Ni-柱純化后的蛋白純度和濃度（即透析除鹽后跑個(gè)SDS-PAGE，考馬斯亮藍(lán)染一下色，看看有沒有雜帶）。如果雜帶較多，且分子量與目的蛋白差別不是很大，超濾沒效果；若雜帶較少，目的蛋白濃度還行，跟著你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊�，確定是否有必要繼續(xù)濃縮或純化；有一點(diǎn)是離子交換前，上樣蛋白濃度最好大一些，之后流出液蛋白濃度才能盡量符合你的要求。 總之，需要跟著你的實(shí)驗(yàn)要求和蛋白本身的可溶性確定用什么方法純化。 |
4樓2015-05-24 07:12:58
3q2002
銀蟲 (小有名氣)
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5樓2015-05-24 09:04:45
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