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山水506銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
western blot 出不來(lái)結(jié)果！��！
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各位達(dá)人，我剛開(kāi)始做western，不過(guò)也做過(guò)好多次了，每一次要么是什么都沒(méi)有，要么是有若隱若現(xiàn)的條帶，結(jié)果總是不好。請(qǐng)問(wèn)是怎么回事��？ PS：用考馬斯亮藍(lán)染色，發(fā)現(xiàn)膠上基本沒(méi)有蛋白了，可在曝光后用麗春紅染膜后沒(méi)有發(fā)現(xiàn)蛋白條帶，但在網(wǎng)上查，說(shuō)有的沒(méi)染出來(lái)也能做出來(lái)啊！ 謝謝各位了~~  |
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山水5069樓2012-11-08 08:36:35
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2樓2012-11-03 14:23:16
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【答案】應(yīng)助回帖
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山水506: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝了 2012-11-07 21:21:42
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山水506: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝了 2012-11-07 21:21:42
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Western是要比考染敏感，肉眼看不到的條帶也wetstern可出條帶。我覺(jué)得樓主的問(wèn)題可以進(jìn)行以下嘗試： 1.可以同時(shí)跑兩塊一樣的膠，一塊直接考染，一塊轉(zhuǎn)膜后考染，進(jìn)行一下對(duì)比； 2.買(mǎi)個(gè)預(yù)染蛋白Marker一起跑、轉(zhuǎn),這樣轉(zhuǎn)沒(méi)轉(zhuǎn)過(guò)去，一目了然，國(guó)產(chǎn)的預(yù)染Marker也不貴； 3.膠上蛋白沒(méi)了，麗春紅膜上沒(méi)染出來(lái)，是不是轉(zhuǎn)過(guò)了，直接到膜底下的濾紙上去了，用PVDF膜要好些。 以上僅供參考，祝實(shí)驗(yàn)順利，呵呵。 |
3樓2012-11-03 14:48:02
4樓2012-11-03 15:03:21
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