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夢(mèng)中江樓新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
畢赤酵母表達(dá)蛋白純化
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| 本人剛開(kāi)始做實(shí)驗(yàn)，畢赤酵母用甲醇誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白在培養(yǎng)基中，應(yīng)該怎樣提純，蛋白加了His-tag標(biāo)簽，用鎳和層析怎樣處理培養(yǎng)基？求鎳和層析的具體純化步驟。 |
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這個(gè)做過(guò) 。直接離心去掉菌體，收集上清。鎳柱處理好，用20mMTris、20mM磷酸二氫鈉‘2水、50mM咪唑、500mM氯化鈉，pH7.4做平衡液。咪唑可以看掛柱的效果調(diào)節(jié)量，氯化鈉就是看后面的柱子調(diào)節(jié)了，如果不怕麻煩透析，就這么加吧。洗脫最開(kāi)始還是要多設(shè)計(jì)幾個(gè)咪唑梯度摸索一下的。樓上兩位蟲(chóng)友的意見(jiàn)我都不是很贊同，分泌表達(dá)，肯定不用破碎的。過(guò)親和柱沒(méi)必要超濾的，除非體積特別大，上樣要非常久（10h），太累。條件摸好，親和柱一洗脫就把目的蛋白濃縮了。 |
5樓2013-07-23 09:03:39
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10樓2014-10-27 16:20:13
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