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科技廣場(chǎng)銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
原核表達(dá)誘導(dǎo)蛋白
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| 請(qǐng)問(wèn)大家原核表達(dá)誘導(dǎo)蛋白時(shí)用的IPTG濃度是多少？，跑SDS-PAGE電泳的時(shí)候，菌體破碎后上清跟菌體分開(kāi)分別上樣嗎？謝謝 |
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8樓2014-04-22 15:37:48
alicelchf
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kx444555: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2013-07-24 12:09:11
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37度 3-4小時(shí)誘導(dǎo)，可以1mM，這樣表達(dá)會(huì)快點(diǎn)，但是前提是你的蛋白不是說(shuō)很么特殊的蛋白 16度過(guò)夜的話，一般都是0.5mM以下了，因?yàn)橐獪睾驼T導(dǎo)。 iptg過(guò)量會(huì)影響你的蛋白表達(dá)，有時(shí)候還會(huì)抑制，所以要慎用！ 跑SDS-PAGE電泳的時(shí)候，菌體破碎后上清跟菌體分開(kāi)分別上樣，因?yàn)檫@是判斷你的蛋白是否可溶的標(biāo)準(zhǔn)，所以需要的。 |
2樓2013-07-24 11:59:27
zhuzhicheng
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3樓2013-07-24 14:53:08
4樓2013-07-24 16:29:44
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