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thinkerboy

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] 相對(duì)熒光定量cDNA的問(wèn)題

求問(wèn)壇子里的各位大神，我做相對(duì)熒光定量，首先提組織RNA，然后反轉(zhuǎn)錄成cDNA，以cDNA做模板做熒光定量，我主要做不同組織里的目的基因的相對(duì)表達(dá)量，請(qǐng)問(wèn)我在提各個(gè)組織RNA，反轉(zhuǎn)錄后，要不要將各個(gè)組織反轉(zhuǎn)錄的cDNA測(cè)一下濃度，然后將各個(gè)組織的cDNA濃度稀釋調(diào)整到相同的濃度，作為模板做熒光定量。也就是說(shuō)我需要調(diào)整一下RNA濃度再反轉(zhuǎn)錄，或者是統(tǒng)一一下各個(gè)組織的cDNA濃度再作模板嗎。

[ Last edited by thinkerboy on 2013-7-26 at 21:10 ]

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1樓 2013-07-26 21:00:26

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東晨瀟曉

新蟲(chóng) (初入文壇)

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【答案】應(yīng)助回帖

★
kx444555: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2013-09-27 09:54:28

我做半定量時(shí)，就是RNA測(cè)一次，然后調(diào)整。之后跟管家基因?qū)Ρ取?

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7樓2013-09-27 09:26:34

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biomed_fanyi

新蟲(chóng) (初入文壇)

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 11:22:44

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2樓2013-07-27 11:19:47

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gaoyang636

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
thinkerboy(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-27 21:44:44

你描述的這個(gè)其實(shí)就是不同sample之間互相比較時(shí) “均一化”的概念:normalization。
而qPCR常用的均一化手段就是通過(guò)一個(gè)被認(rèn)為在不同組織中表達(dá)量恒定的基因作為標(biāo)桿，即內(nèi)參基因，比如actin。

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3樓2013-07-27 19:43:15

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Sthunder

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
thinkerboy(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-07-27 21:44:51

沒(méi)有實(shí)質(zhì)性必要，因?yàn)槟阌袃?nèi)參。但在反轉(zhuǎn)錄之前一定要測(cè)總RNA濃度，防止?jié)舛冗^(guò)高，反轉(zhuǎn)錄酶不足導(dǎo)致反轉(zhuǎn)錄不完全！ Good luck！

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4樓2013-07-27 21:15:47

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