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574759350鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR產(chǎn)物平末端化問題 已有2人參與
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| 我要做PCR產(chǎn)物和載體一個平末端一個粘性末端的連接,先將PCR產(chǎn)物用T4 DNA聚合酶削去A尾,然后再用另一個內(nèi)切酶切割,實(shí)現(xiàn)一個平端一個粘性末端,現(xiàn)在有一個問題是T4 DNA聚合酶處理平端之后還要不要膠回收再用另一個內(nèi)切酶切割,如果膠回收的話可能濃度就很低了,因?yàn)閷?shí)驗(yàn)中一共進(jìn)行好幾次回收,如果不回收的話又怕前一步的反應(yīng)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn),大家有沒有做過的?給個建議 |
至尊木蟲 (著名寫手)
鐵蟲 (小有名氣)
至尊木蟲 (著名寫手)
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可以試試這篇論文的方法,雖然是個小的改進(jìn),但是值得一試,而且很方便: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256 |
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