 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2440 | 回復(fù): 5 | |||
小_菜鳥(niǎo)新蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
western blot出現(xiàn)很多雜帶，求助，交流？謝謝 已有2人參與
|
|
SDS-PAGE有三條帶，western blot剛開(kāi)始用5%脫脂奶粉封閉2h； 一抗HIS 1:1000，2h；二抗羊抗兔1:5000，2h；洗滌用TBST 5X5min，出現(xiàn)超多的雜帶，降低一抗（1:3000）、二抗（1:10000）的濃度后從一束的雜帶到只剩三條雜帶，而且大小偏大，目的蛋白加上his應(yīng)該在20KDa左右，但現(xiàn)在出現(xiàn)的三條都是偏大的，有沒(méi)有戰(zhàn)友做過(guò)��？改怎么去調(diào)整比較好呢？謝謝啦（表達(dá)載體是pET28a+） SDS-PAGE.jpg 很多雜帶.jpg 連對(duì)照都出現(xiàn)了.jpg 這是調(diào)整抗體濃度后的.jpg |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有300人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 文章中的western blot圖為和都沒(méi)有marker?
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求助western blot非特異條帶非常多
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求助Western Blot實(shí)驗(yàn)條帶沒(méi)出現(xiàn)的原因分析及解決辦法
已經(jīng)有7人回復(fù)
- western blot出現(xiàn)多條帶是什么原因
已經(jīng)有8人回復(fù)
- western blot的陰性對(duì)照怎么設(shè)計(jì)��？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- Western 內(nèi)參抗體GAPDH
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 做western blotting時(shí)，抗體稀釋倍數(shù)對(duì)結(jié)果影響大嗎？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- western blot中古怪的非特異性條帶
已經(jīng)有9人回復(fù)
- western 中，目的蛋白沒(méi)有，但是Marker 暴出來(lái)了，什么原因啊
已經(jīng)有16人回復(fù)
- western-blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果，大家?guī)兔Ψ治鱿?/a>
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 如何在蛋白純化后去除6組氨酸(6His)標(biāo)簽
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 求助，Western-Blot轉(zhuǎn)膜不成功
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 為啥western有這么多條帶
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助/交流】westernblot
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】western blot的內(nèi)參總是不齊怎么辦
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR產(chǎn)物切膠回收，總是有一條雜帶的大小是目的片段的兩倍大小
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教大分子量蛋白western blot轉(zhuǎn)膜的一些問(wèn)題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】western-blot 一抗孵育時(shí)間是不是越長(zhǎng)越好
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】westernblot的背景怎么消除呀
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教Western blot出現(xiàn)非特異性條帶的怎么解決
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】western blot中，蛋白經(jīng)SDSPAGE后不是變性了嗎，怎么還能和一抗結(jié)合？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】western blot 的一抗二抗由來(lái)？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】western blot用奶粉封閉的原理
已經(jīng)有18人回復(fù)
櫻落feng
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 892.6
- 帖子: 91
- 在線: 22.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2409548
- 注冊(cè): 2013-04-09
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 免疫識(shí)別/免疫耐受/免疫調(diào)
2樓2015-06-19 11:07:32
calorimetry
銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 51 (初中生)
- 金幣: 126.8
- 紅花: 13
- 帖子: 569
- 在線: 36.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3901654
- 注冊(cè): 2015-06-01
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小_菜鳥(niǎo)(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+4, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-06-19 20:44:39
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小_菜鳥(niǎo)(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+4, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-06-19 20:44:39
|
我個(gè)人認(rèn)為可能是： 一。SDS PAGE電泳出的問(wèn)題： 1.SDS電泳時(shí)，樣品上樣前處理不好，可能SDS的量不夠，平均1克蛋白質(zhì)結(jié)合1.4克SDS，實(shí)際操作時(shí)SDS還應(yīng)該多一些。 2.電泳時(shí)間可能沒(méi)有掌握好。 3.可能是SDS電泳的“鬼帶”“出現(xiàn)了。 鬼帶”就是在跑大分子構(gòu)象復(fù)雜的蛋白質(zhì)分子時(shí)， 常會(huì)出現(xiàn)在泳道頂端 （有時(shí)在濃縮膠中）的一些大分子未知條帶或加樣孔底部有沉淀， 主要由于還原劑在加熱的過(guò)程中被氧化而失去活性，致使原來(lái)被解離的蛋白質(zhì)分子重新折疊結(jié)合和亞基重新締合，聚合成大分子，其分子量要比目標(biāo)條帶大，有時(shí)不能進(jìn)入分離膠。但它卻于目標(biāo)條帶有相同的免疫學(xué)活性，在 WB反應(yīng)中可見(jiàn)其能與目標(biāo)條帶對(duì)應(yīng)的抗體作用。 處理辦法：在加熱煮沸后，再添加適量的 DTT 或 Beta 巰基乙醇，以補(bǔ)充不足的還原劑；或可加適量 EDTA 來(lái)阻止還原劑的氧化。 有關(guān)SDS電泳的各種異常情況可以參考： SDS-PAGE 電泳問(wèn)題討論（實(shí)例版）-----凌波麗個(gè)人總結(jié)之四 http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=7324819 二、抗體-抗原相互作用出的問(wèn)題： 另外，就是樓主的抗體的原因了。 很可能一抗的專(zhuān)一性不夠，或者用量還是大了。 或者二抗的專(zhuān)一性不夠。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
小_菜鳥(niǎo)3樓2015-06-19 11:32:42
小_菜鳥(niǎo)
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 50.9
- 散金: 5
- 紅花: 1
- 帖子: 63
- 在線: 21.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3442414
- 注冊(cè): 2014-09-26
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
4樓2015-06-19 15:01:20
小_菜鳥(niǎo)
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 50.9
- 散金: 5
- 紅花: 1
- 帖子: 63
- 在線: 21.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3442414
- 注冊(cè): 2014-09-26
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
5樓2015-06-19 16:05:01
calorimetry
銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 51 (初中生)
- 金幣: 126.8
- 紅花: 13
- 帖子: 569
- 在線: 36.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3901654
- 注冊(cè): 2015-06-01
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
6樓2015-06-23 08:33:17
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 小_菜鳥(niǎo) 的主題更新
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[基金申請(qǐng)] 山東省面上項(xiàng)目限額評(píng)審 +4 | 石瑞0426 2026-03-19 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)070300 學(xué)碩336求調(diào)劑 +4 | vv迷 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑院校信息 +4 | CX 330 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +5 | 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
 一志愿東華大學(xué)控制學(xué)碩320求調(diào)劑
+3
|
Grand777 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)學(xué)碩調(diào)劑，一志愿985 +5 | 張vvvv 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料工程專(zhuān)碩 348分求調(diào)劑 +3 | 冬辭. 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 妮妮ninicgb 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境總分308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +4 | 某某某某位 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)]
學(xué)校已經(jīng)提交到NSFC，還能修改嗎？
 40+4
|
babangida 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +5 | 紅衣隱官 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +3 | Jack?k?y 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22408 344分 求調(diào)劑 一志愿 華電計(jì)算機(jī)技術(shù) +4 | solanXXX 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專(zhuān)碩英一數(shù)二306 +7 | z1z2z3879 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +8 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 261求B區(qū)調(diào)劑，科研經(jīng)歷豐富 +3 | 牛奶很忙 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085410人工智能專(zhuān)碩317求調(diào)劑（0854都可以） +4 | xbxudjdn 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +5 | February_Feb 2026-03-19 | 5/250 |
|