 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 6637 | 回復(fù): 38 | |||||||
| 【獎(jiǎng)勵(lì)】 本帖被評價(jià)7次，作者raindrop8316增加金幣 6.5 個(gè) | |||||||
| 當(dāng)前主題已經(jīng)存檔。 | |||||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||||||
[資源]
（木蟲生物專題討論）之核酸提取純化專題貼
|
|||||||
|
———————————————————————————————— 繼續(xù)招帖子工，招聘鏈接：http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=910794&fpage=1 ——————————————————————————————————— 不才經(jīng)過半個(gè)多月的整理，核酸提取純化專題終于完成了。 本專題共分兩篇 一為技巧篇 二為解惑篇 其中每篇分別整理成三章： DNA，RNA（含mRNA）和質(zhì)粒。 請各位多多支持！ 如果你覺得你從中學(xué)到了一點(diǎn)東西， 就把它頂起來吧， 讓更多的人從中獲益~    [ Last edited by raindrop8316 on 2008-8-19 at 08:44 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 原創(chuàng) | 關(guān)于RNA | 經(jīng)驗(yàn) | 音樂的夢 |
| 實(shí)驗(yàn)相關(guān) |
» 猜你喜歡
326求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
333求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
一志愿東華大學(xué)控制學(xué)碩320求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
考研化學(xué)學(xué)碩調(diào)劑，一志愿985
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
化學(xué)工程321分求調(diào)劑
已經(jīng)有21人回復(fù)
-
0703化學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
0703化學(xué)調(diào)劑 ，六級(jí)已過，有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
326求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
311求調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
311求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
|
第一章 DNA提取與純化 主題16：植物線粒體DNA的提取 鏈接：http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=569136&fpage=206 無解答 主題17：CTAB法提DNA出現(xiàn)問題（碎末狀沉淀） 鏈接：http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=578068&fpage=195 解答1：guohuayin 我覺得碎末狀沉淀是你沒有去除干凈的蛋白質(zhì)，在苯酚－氯仿重提階段，建議不要為了獲取大量的的DNA而將中間的那層吸出來，那層是蛋白質(zhì)，吸取上清液的時(shí)候，在最后快要吸完的時(shí)候，最好不要繼續(xù)吸出了，防止蛋白質(zhì)污染。建議你用苯酚－氯仿抽提一次，再用氯仿：異戊醇抽提一次。并且用70％的酒精多洗滌幾次，酒精洗滌的作用主要是去除鹽分。最后酒精洗滌完后，一定要晾干后再用適量的雙蒸水溶解或者TE緩沖液溶解。 解答2：沙礫 建議大家在做DNA沉淀的時(shí)候加入1/10體積的3M的醋酸鈉，再加無水乙醇，沉淀效果會(huì)更好 主題18：提取DNA檢測發(fā)現(xiàn)三條帶，誰能解釋? 鏈接：http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=584447&fpage=195 解答1：tuotuozw 材料，過程都有可能造成DNA的怪異現(xiàn)象出現(xiàn) 解答2：xuuue 可能是連同RNA一起提了出來，這很正常，你去RNA了嗎？ 解答3：如果泳道沒有明顯彌散現(xiàn)象，而且LZ電泳中出現(xiàn)的3條帶中的2條挨得很進(jìn)，且與第3條距離較遠(yuǎn)的話，那多數(shù)應(yīng)該是xuuue所說的提取樣品中混有RNA，加點(diǎn)RNaseA處理一下就可以了。 主題19：核酸提取求助:幫忙分析下失敗原因在哪? 鏈接：http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=593897&fpage=188 解答1：guohuayin 抽提核酸中我的做法是 首先加入等體積的苯酚：氯仿：異戊醇（體積比25：24：1），輕輕上下顛倒幾次，混勻2分鐘左右，12000rpm，離心10分鐘； 然后吸取上清液，加入等體積的氯仿：異戊醇（體積比24:1)和上面的步驟一樣，抽提一次，取上清 這兩步試驗(yàn)可以反復(fù)三次，主要是去除蛋白質(zhì)和糖類等雜質(zhì)。 最后加入1/10體積的3M的醋酸鈉（.PH5.3），2倍體積的無水乙醇沉淀DNA。 －20度放置30分鐘，室溫15000rpm,離心10分鐘，沉淀用70％的乙醇洗滌去除鹽分，稍微干燥后，加入適量的緩沖液溶解。－20度冰箱中保存。 解答2：yangguoxing888 應(yīng)該和上下顛倒的時(shí)間沒關(guān)系。沒準(zhǔn)是你基因組提取后溶解，如果緩沖液多得話DNA濃度會(huì)低，這樣也不一定能跑出來，至于前端的東西，沒準(zhǔn)是RNA。 解答3：tsguest 你上下顛倒混勻的時(shí)間太長了，這樣容易把DNA弄斷，而且如果你要是需要大片段的DNA，這樣做更是不行。你如果把DNA一提出來，馬上就跑，有可能就什么也跑不出來，你可以用TE溶了DNA后，在4度放置一晚，第二天再跑電泳就有可能有你提的DNA， 解答4：yzh-1999 說太劇烈導(dǎo)致鏈斷裂，最后使得溶液渾濁這個(gè)說法太牽強(qiáng)。 我還是同意樓主說的，是消化不徹底的問題。我抽提RNA時(shí)，若樣本太多，導(dǎo)致Trizol不夠用的時(shí)候，也會(huì)出現(xiàn)大量的渾濁。我想可能是你沒有加蛋白酶K，或量太少，導(dǎo)致蛋白消化不徹底，所以后續(xù)加酚不能使它沉淀分層。 冷凍后，這些懸在溶液中的蛋白析出，很正常。 所以，從消化開始，再注意點(diǎn)。 解答5：insect2004 你用的EB染色是不是濃度太低，或用的時(shí)間太長，把EB換成新的，另外加上MARK, 這樣如果MARK跑出來而你的DNA沒有跑出來，那就說明不是染色的問題，你再找別的原因，如果你不是用試劑盒提得，那你就檢查一下你的關(guān)鍵試劑有沒有問題，原因得一步步找，實(shí)驗(yàn)做得多了，你的經(jīng)驗(yàn)也就多了，你再多提幾次 解答6：yzh-1999 前面那些彌散條帶可能是RNA，降解的DNA等等。 建議重新配制和準(zhǔn)備試劑， 消化時(shí)間長一些，比如甚至可以將正在消化的樣品在37度的搖床上過夜 解答6：insect2004 把樣品保存在－80度，保存1－2年不會(huì)有問題，如果你們實(shí)驗(yàn)室沒有超低溫冰箱，那你就把樣品保存在－20度，保存一兩個(gè)月應(yīng)該沒有問題。關(guān)鍵試劑重新配，也不費(fèi)多少事 主題20：求助DNA提�。� 鏈接：http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=597267&fpage=187 解答1：guohuayin 首先你先檢測一下你的有沒有提取出DNA，這個(gè)問題你可以先測定吸光度，同時(shí)也可以測定一下純度，確定提取出來DNA后，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增目的基因。擴(kuò)增的時(shí)間一定要加入對照，看看PCR體系有沒有問題。 解答2：自然風(fēng) 你的試劑盒加酶之后處理的時(shí)間是不是比較短？因?yàn)樵噭┖信c常規(guī)提DNA的方法的差別之一就是試劑盒酶處理的時(shí)間要短得多，可能有這方面的原因。 另外，你的試劑盒是否是用柱子回收的？可以試試用常規(guī)的酚氯仿代替柱子回收看看，因?yàn)閷τ诖笃蔚腄NA，用柱子回收效果稍差。 還有，是不是因?yàn)闃悠返牧勘容^少，才導(dǎo)致檢測不清楚？ 解答3：bioartist 提取總DNA，破胞很關(guān)鍵��！ 上海生工的試劑盒都是用于一般菌體的提取，對胞外多糖多的細(xì)菌和革蘭氏陽性菌，一般都比較難提�。� 另外，有時(shí)候，試劑盒提取的DNA量非常少，電泳檢測不到，但可以用于PCR擴(kuò)增目的基因，其他操作不宜！ 其實(shí)許多傳統(tǒng)的方法提取效果都很好的！！ 解答4：xiaopu_yin 你抽提的是細(xì)菌、放線菌還是酵母？我用的是博達(dá)泰克的試劑盒，一般用液氮或在－80度反復(fù)凍融幾次就會(huì)有較好的效果。總之破胞很重要，而菌體量過多有時(shí)效果反而不好。 |
9樓2008-08-15 17:27:11
I．技巧篇
2樓2008-08-15 17:13:35
3樓2008-08-15 17:15:07
4樓2008-08-15 17:17:49
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
 一志愿東華大學(xué)控制學(xué)碩320求調(diào)劑
+3
|
Grand777 2026-03-21 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +12 | 冬十三 2026-03-15 | 13/650 |
|
|
[考研] 化學(xué)調(diào)劑 +4 | yzysaa 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求助 +5 | 夢里的無言 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +5 | 紅衣隱官 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 279分求調(diào)劑 一志愿211 +14 | chaojifeixia 2026-03-19 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 0856材料專碩353求調(diào)劑 +3 | NIFFFfff 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 司空. 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 中南大學(xué)化學(xué)學(xué)碩337求調(diào)劑 +3 | niko- 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)0703化學(xué)318分，有科研經(jīng)歷，求調(diào)劑 +4 | 一瓶苯甲酸 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 319求調(diào)劑 +3 | 小力氣珂珂 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工專碩調(diào)劑 +7 | heming3743 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +7 | 困于星晨 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研]
320求調(diào)劑0856
+3
|
不想起名字112 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +5 | pupcoco 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 收復(fù)試調(diào)劑生 +4 | 雨后秋荷 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 26博士申請 +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 文思客 2026-03-16 | 7/350 |
|